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細胞培養基在細胞培養過程中的應用和基本技術原理

來源: 智立中特(武漢)生物科技有限公司    2023年12月05日 12:10  

  細胞培養基是一種必bu可少的液體培養基,用于支持和擴展細胞在體外的生長。合成培養基種類很多,常用的有十多種,目前使用zui廣泛的是RPMI 1640.MEM,DMEM和DMEM/F12.

  RPMI 1640 培養基:最初為培養小鼠白血病細胞的需要而制備。開始的配方適合懸浮細胞的生長,主要針對淋巴細胞,后經幾次改良從RPMI 1630.1634而至1640.其成分較為簡單。現發現它適應于多種類型細胞的生長,包括腫瘤細胞以及很多正常組織細胞體外培養。

  MEM 培養基:是zui低必需培養基,主要是貼壁細胞的培養,修改配方后也可用于其他類型細胞培養,例如如無鈣(Ca)MEM培養基可被用于懸浮細胞的培養,而Hank’s平衡鹽的MEM培養基可被用于二倍體細胞的培養。

  DMEM 培養基:DMEM細胞培養基是在MEM培養基的基礎上研制的。與MEM比較增加了各種成分用量,同時又分為高糖型(4500mg/L)和低糖型(1000mg/L)。而MEM中葡萄糖含量1000mg/L。低糖的酵母適合在7%以下的糖濃度中生存,而高糖的酵母適合在7%以上糖濃度中生存。DMEM-高糖型適合生長較快、附著性較差的腫瘤細胞,克隆細胞,也可用于DNA轉染的轉化細胞的培養;高糖型使細胞生長過快,不利于融合細胞的染色體穩定,做單抗細胞融合時,一般使用低糖型,DMEM-低糖型主要用于干細胞的培養。

  DMEM/F12(1:1) 培養基:DMEM培養基營養成分濃度較高,F12培養液成分復雜,含有多種微量元素。DMEM和F12以1:1結合,稱為DMEM/F12培養基,該培養基適用于血清含量較低條件下細胞培養,常用于細胞的克隆生長及干細胞培養。

  Neurobasal:這是一種專為神經細胞設計的培養基,適用于神經元和神經膠質細胞的培養。

  培養基的顏色主要是酚紅來顯示的,酚紅指示顏色非常靈敏,p值范圍為6-8.顏色由黃變為紫紅。酚紅不是必須的,在有些情況下甚至是多余的,酚紅有類似固醇類激素的作用,如果涉及到固醇類激素相關的細胞培養,zui,好不要添加。但是為了培養方便,能讓我們直觀地感覺培養液的狀況,加入酚紅后,如果培養液偏酸了,就顯示偏黃色,偏堿性了就顯示偏紫色。另外在做流式細胞的時候,酚紅會對結果產生影響,因此也不要添加。

  在細胞培養過程中,檢查培養液顏色和透明度變化,顏色變黃,說明pH下降;變紅或紫紅色,說明pH上升,細胞生長停滯、死亡,一般生長穩定的細胞2-3天換液一次,生長緩慢的細胞可3-4天換液一次。一旦新鮮的培養基中添加了血清和抗生素,建議1周內使用完。只有充分了解培養基,才能養好細胞!

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